¿Cómo se mide el ADN con el fluorómetro?

noviembre 1, 2022by Kalstein
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Los ácidos nucleicos son moléculas biológicas que cumplen funciones esenciales en todas las células y virus, entre estas implica el almacenamiento y la expresión de información genética. El ácido desoxirribonucleico (ADN, por sus siglas), es una biomolécula que lleva codificada la información genética que caracteriza a los diferentes seres vivos. Permite regular el funcionamiento de las células, controla la transmisión de la información, coordina las interacciones del funcionamiento celular y tisular, regula los procesos de reproducción y mantenimiento de las características propias de cada especie; todo esto a través del código genético.

En la actualidad, el estudio de la variación genética permite explicar los patrones y procesos evolutivos. En la biología molecular, estos estudios se abordan mediante técnicas que hacen posible analizar la variación en la molécula del ADN a detalle. Un ejemplo de estas son los PCR (por las siglas en inglés de Polymerase Chain Reaction) y secuenciación del ADN, como lo son los marcadores moleculares, segmentos de ADN con o sin funciones conocidas. Los datos moleculares han permitido estudiar con mayor precisión los patrones de comportamiento, la selección natural, las interacciones biológicas, la composición, entre otras.

Con el tiempo se han desarrollado diversos protocolos experimentales para extraer ADN, así como garantizar la eliminación de inhibidores que dificultan el análisis molecular. La preparación de la muestra en laboratorio es importante, por lo tanto, se debe seguir procedimientos adecuados para su procesamiento y almacenamiento. Tener resultados confiables parte inicialmente de la capacidad para preparar las muestras en cantidades adecuadas y analizarlas manteniendo la calidad en cualquier procedimiento. Los protocolos tradicionales consisten principalmente en cinco etapas: homogeneización del tejido, lisis celular, separación de proteínas y lípidos, y precipitación. También se puede realizar la extracción mediante el empleo de kits comerciales.

Después del aislamiento del ADN, la cuantificación y el análisis de calidad son necesarios para determinar la cantidad aproximada de ADN obtenida. Según numerosos estudios independientes, se ha demostrado que el fluorómetro es un modo de estimación de ácido nucleico mucho más preciso y reproducible. Los procedimientos fluorométricos son populares para medir ADN, ya que son simples y mucho más sensibles que otros métodos.

Procedimiento para medir el ADN con un fluorómetro

  • Encienda el fluorímetro minutos antes de usarlo.
  • Preparar las soluciones estándar de ADN (100-5000 ng/ml concentración final de ADN) y la solución de la muestra de ensayo (10-500 ng/ml concentración final de ADN).
  • Ponga a cero el instrumento: prepare un ensayo en blanco utilizando 2 ml de la solución de ensayo de una concentración alta de ADN. Inserte la
  • cubeta en el pozo, cierre la tapa y presione la tecla correspondiente para que aparezca «0», luego retire la cubeta.
  • Calibre el instrumento: suministre 2 ml de la solución estándar de ADN a 2 ml de solución de ensayo en la cubeta y mezcle. Coloque la cubeta en el pozo, cierre la tapa y presione el botón para calibrar. Para un ensayo de rango bajo ingrese 100, para el ensayo de rango alto 1000, luego presione “enter”, y después de que se muestre el valor ingresado, retire la cubeta.
  • Ponga a cero el instrumento nuevamente: vacíe, enjuague y seque la cubeta. Agregue 2 ml de la solución de ensayo utilizada en el paso 2, inserte la cubeta en el pocillo, cierre la tapa y presione la tecla que corresponde hasta que aparezca “0”. Después de que aparezca «0», luego retire la cubeta.
  • Ponga la mezcla a evaluar en una cubeta limpia y seca, mezcle bien. Coloque la cubeta en el pocillo, cierre y registre la medida.

Características del fluorómetro para medir ADN

  • Precisión: para la medición de ADN debe poder medir de 1 a 20 μl de muestras, incluso si son diluidas Es necesario que pueda cualquier cosa que absorba a 260 nm, incluyendo ADN, ARN, proteínas, nucleótidos libres y exceso de sales
  • Fácil y práctico: debe contar con la tecnología adecuada que facilite el flujo de trabajo, la exportación de los datos, que su manejo sea sencillo para que genere resultados confiables, sensibles y específicos.
  • Simplicidad y velocidad de respuesta: debe tener buen rendimiento para el análisis de varias muestras, siempre proporcionando resultados.
  • Económico: los costos asociados a los reactivos y la instrumentación son bajos, en relación con otras técnicas de análisis.

En Kalstein somos FABRICANTES, le ofrecemos equipos de alta calidad, el fluorómetro de la serie YR412-A, tiene una fuente de luz LED de 260 nm, de rango dinámico lineal de 0,995, medición fácil en 3 segundos para ADN, ARN y proteínas, con detector de fotodiodo cuyo límite de detección de ADN más bajo es 0.5pg / ul. Posee dos canales de fluorescencia para ácido nucleico, adaptador de tubo qPCR de 0,5 ml, y adaptador de tubo qPCR de 0,2 ml. Es un equipo ligero que ofrece practicidad y versatilidad para el trabajo en el laboratorio. Si desea obtener más información sobre nuestros productos, PRECIOS, para la COMPRA o VENTA, visítenos en nuestro catalogo AQUI

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